大豆製品中尿素酶活性的測定方法

方法一：酸度計法

1. 原理:根據AOCS法，測定出自於大豆及加工產品的尿素酶活化度。

2. 儀器

（1） 可調節溫度的恒溫水浴鍋

（2） pH計

（3） 50ml碘瓶

3. 試劑

（1） 磷酸二氫鉀

（2） 磷酸氫二鉀

（3） 尿素[CO（NH2）2]

（4） 甲苯

（5） 0.05M磷酸緩衝液：

磷酸二氫鉀3.403g    100ml水中

                                    混合1000ml，調pH為7.0

磷酸氫二鉀4.335g    100ml水中

（6） 尿素緩衝液：取分析純尿素15g，溶於500ml磷酸緩衝液，再加5ml甲苯防腐劑（防止黴菌發酵），調pH 值為7.0

4. 步驟

                         0.8g樣品+40ml尿素緩衝液

試樣粉碎到0.35mm以下                                    搖勻後放入                        0.8g樣品+40ml磷酸緩衝液

            30℃ 恒溫水浴槽中，每5min搖勻一次，反應30min，在5min內測定pH值。

5. 計算：尿素酶活化度（pH值上升值）=試樣的pH測定值-空白的pH值

 方法二  尿素酶快速測定法——酚紅法（參考法）

稱取0.2g經磨細的豆粕樣品放置試管中，注入2%尿素1ml，開始計時，加入指示劑苯酚2滴，再加入8ml蒸餾水，（20-30s）開始震搖試管約10s，直至全脂豆粕浮在液體層，每搖動10s約等待3s，再觀察溶液層顏色，如果出現粉紅色，計下時間，與尿素酶活性表對照，如果顏色不變，則再搖10s約等待3s，然後再觀察溶液層顏色，重複操作，如一直不變，再重頭開始。（做實驗以前，要先做空白實驗，如果呈粉紅色則指示劑已經不能用，重新配置指示劑。震搖停止後觀察溶液的顏色時要等3s，不可太快或太慢，否則會看錯，晚間不能做該實驗。

方法三：尿素酶活性快速測定法——酚紅法（粗略法）

1. 原理：尿素酶 + 尿素          氨氣（用酚紅作指示劑）  

2.試劑

（1） N氫氧化鈉：稱0.4g氫氧化鈉溶於100ml水中。

（2） 0.1N硫酸：將2.77ml濃硫酸加入1000ml水中稀釋。

（3） 尿素—酚紅溶液：

0.14g酚紅溶於35ml水中+7ml0.1N氫氧化鈉

                                                混合 0.1N硫酸滴定  琥珀色

           21g尿素溶於300ml水中

方法：將一匙粉碎過的黃豆粕放入小玻皿中，將已調好的尿素——酚紅溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至*錦濕，停留5min，觀察豆粕的紅色反應。